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武漢貝科新肽科技有限公司
主營：原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
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以菌落原位雜交為例：對分散在若干個瓊脂平板上的少數(shù)菌落（100-200）進(jìn)行篩選時，可采用該方法。將這些菌落歸并到一個瓊脂主平板以及已置于第二個瓊脂平板表面的一張纖維素濾膜上。經(jīng)培養(yǎng)一段時間后，對菌落進(jìn)行原位裂解。主平板應(yīng)貯存于4℃直至得到篩選結(jié)果。
將少數(shù)菌落轉(zhuǎn)移到纖維素濾膜上
（1） 在含有選擇性的瓊脂平板上放一張纖維素濾膜。
（2） 用無菌牙簽將各個菌落先轉(zhuǎn)移至濾膜上，再轉(zhuǎn)移至含有選擇性但未放濾膜的瓊脂主平板上。應(yīng)按一定的格子進(jìn)行劃線接種（或打點(diǎn)）。每菌落應(yīng)分別劃線于兩個平板的相同位置上。后，在濾膜和主平板上同時劃一個含有非重組質(zhì)粒的菌落。
（3） 倒置平板，原位雜交檢測，于37℃培養(yǎng)至劃線的細(xì)菌菌落生長到0.5-1.0mm的寬度。
（4） 用已裝防水黑色繪圖墨水的針頭穿透濾膜直至瓊脂，在3個以上的不對稱位置作標(biāo)記。在主平板大致相同的位置上也作上標(biāo)記。
（5） 用Parafilm膜封好主平板，倒置貯放于4℃，直至獲得雜交反應(yīng)的結(jié)果。
（6） 裂解細(xì)菌，按本段下面所述方法，使釋放的DNA結(jié)合于纖維素濾膜。
原位雜交的基本原理是利用標(biāo)記的核酸探針與細(xì)胞或組織中的DNA或RNA進(jìn)行雜交，熒光原位雜交，然后通過檢測標(biāo)記來識別探針的位置。這使得研究人員能夠在細(xì)胞或組織中確定特定基因或基因組區(qū)域的位置和表達(dá)水平。
原位雜交可以用于多種類型的實(shí)驗(yàn)。例如，它可以用來檢測特定基因在發(fā)育過程中的表達(dá)模式，或者確定特定基因變異在細(xì)胞中的分布。此外，原位雜交還可以用于診斷疾病，例如某些類型的，以及監(jiān)測效果。
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