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武漢科銳諾生物科技有限公司
主營：外泌體,透射電鏡,掃描電鏡,石蠟切片等技術(shù)服務(wù)
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后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液為1%多聚甲醛/0.1 M PBS（PH7.2-7.6），含有1/1000 DEPC。室溫固定 10分鐘。蒸餾水洗滌3次。
原位雜交的預(yù)雜交：濕盒的準(zhǔn)備——干的雜交盒底部加20%甘油20ml以保持濕度。按每張切片20μι加預(yù)雜交液。恒溫箱38-42℃2—4小時。吸取多余液體，不洗。
雜交——按每張切片20μι雜交液，加在切片上。將原位雜交專1用蓋玻片的保護膜揭開后，蓋在切片上。恒溫箱38-42℃雜交過夜(根據(jù)雜交情況可以調(diào)節(jié))。
雜交后洗滌：揭掉蓋玻片，37℃左右水溫的2×SSC洗滌5分鐘×2次；37℃0.5×SSC洗滌15分鐘×1次; 37℃0.2×SSC洗滌15分鐘×1次(如果有非特異性染色，重復(fù)0.2×SSC洗滌15分鐘×1-2次)。
既要充分保留被測核酸，（特別是RNA）不被降解，又要盡可能維持原有組織或細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)。
步驟：基本與免1疫組織化學(xué)技術(shù)相似，即組織要求新鮮和迅速投入固定液。固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS（PH7.0-7.6），含有1/1000 DEPC。標(biāo)本較大時用刀片切成厚度不超過4mm的小塊，固定1小時即可，較大的標(biāo)本固定不要超過2小時。某些組織對過度固定尤其敏感，如動物大腦，固定時間30-40分鐘，一般不要超過1小時。取材過程中避免手指、唾液和未經(jīng)RNA酶抑制處理的器具接觸標(biāo)本。冷凍切片以厚5~30um佳，40℃烤箱內(nèi)干燥2小時后儲存在-80℃超低溫冰箱，在-20℃可保存２～３周，在-70℃可保存數(shù)月之久。
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第4年
