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武漢貝科新肽科技有限公司
主營：原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
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原位雜交第三天
1） 用1ml含10％熱滅清的MABT溶液置換溶液，放置搖床上25分鐘，然后用1mlMABT置換，25分鐘，植物原位雜交，再用1mlMABT溶液置換，一小時以上，后用1mlMABT溶液置換，25分鐘。
2） 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置五分鐘。
3）將胚胎轉(zhuǎn)入十六孔板中，湖北原位雜交，吸去staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate(底物，用之前加5mM左旋米唑)，十六孔板外面包上錫箔紙以避光，避免搖動，室溫下顯色。
4）每隔一小時觀察胚胎是否開始顯色
5）將顯色完全的胚胎中的底物吸出，用PBST洗兩三次后加上4％多聚甲醛固定，拍照。
6）4C冰箱保存。
植物原位雜交的應(yīng)用包括：
研究基因表達(dá)：通過觀察熒光信號的位置和數(shù)量，熒光原位雜交，可以確定目標(biāo)基因在植物組織中的表達(dá)模式和位置。
染色體定位：將目標(biāo)基因與染色體中的特定位置進(jìn)行比較，可以確定目標(biāo)基因在染色體中的位置和分布。
基因：通過原位雜交技術(shù)，可以確定目標(biāo)基因的序列和位置，為基因提供重要的參考信息。
檢測物種或品種特異性：通過原位雜交技術(shù)可以檢測出不同物種或品種之間基因表達(dá)的差異，從而為物種或品種特異性研究提供依據(jù)。
遺傳育種：通過原位雜交技術(shù)可以檢測出不同品種之間基因表達(dá)的差異，從而為遺傳育種提供重要的參考信息。
將32 P標(biāo)記的雙鏈DNA探針于100℃加熱5分鐘，迅速置于冰浴中。單鏈探針不必變性。將探針加到雜交袋中雜交過夜。雜交期間，盛濾膜的容器應(yīng)蓋嚴(yán)，以防液體蒸發(fā)。
雜交結(jié)束后，去除雜交液，立即于室溫把濾膜放入大體積（300-500ml）的2×SSC和0.1% SDS溶液中，輕輕振搖5分鐘，染色體原位雜交，并將濾膜至少翻轉(zhuǎn)一次。重復(fù)洗 一次，同時應(yīng)避免膜干涸。
68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜兩次，每次1-1.5小時。此時已可進(jìn)行自顯影。如背景很高或?qū)嶒?yàn)要求嚴(yán)格的洗膜條件，可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃將濾膜浸泡60分鐘。
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第3年
