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主營(yíng)：原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動(dòng)子篩選
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洋蔥亞細(xì)胞定位 如何定位重要細(xì)胞器 亞細(xì)胞定位辦法就是用來(lái)肯定細(xì)胞內(nèi)分子在細(xì)胞中的位置的一種辦法。如何使用熒光顯微鏡技術(shù)來(lái)定位洋蔥細(xì)胞中的一些重要細(xì)胞器。
植物細(xì)胞是由許多不同的細(xì)胞器組成的，這些細(xì)胞器在細(xì)胞內(nèi)扮演著不同的角色。為了研究這些細(xì)胞器的功能和位置，科學(xué)家們使用各種技術(shù)來(lái)對(duì)它們進(jìn)行定位。其中一種常用的技術(shù)是熒光顯微鏡技術(shù)，它可以通過(guò)標(biāo)記特定的蛋白質(zhì)或化合物來(lái)觀察它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)的位置。
亞細(xì)胞定位操作步驟
1、通過(guò)一些在線網(wǎng)站預(yù)測(cè)亞細(xì)胞定位
2、亞細(xì)胞定位載體構(gòu)建
（1）引物設(shè)計(jì)：利用引物設(shè)計(jì)軟件，根據(jù)pEGP-MCS-N1或pEGP-C1-MCS的酶切位點(diǎn)設(shè)計(jì)目的基因引物。
（2）載體構(gòu)建：將PCR產(chǎn)物酶切后插入pEGP-MCS-N1或pEF-C1-MCS，得到表達(dá)目的基因與EGP融合蛋白質(zhì)的真核表達(dá)載體。
3、細(xì)胞轉(zhuǎn)染
當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)，接種到共聚焦顯微鏡的玻璃底培養(yǎng)皿（35mm petri dish，10 mm Microwell）中，培養(yǎng)過(guò)夜。當(dāng)細(xì)胞貼壁率達(dá)到30%~50%時(shí)，將融合綠色熒光蛋白GFP的重組載體質(zhì)粒和目標(biāo)細(xì)胞器質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞。37℃孵箱培養(yǎng)24~72h。
4、激光掃描共聚焦顯微鏡觀察
將上述細(xì)胞分別在24、36、48、72h的時(shí)間點(diǎn)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇對(duì)應(yīng)激發(fā)波長(zhǎng)（常用405nm、488nm和561nm），使用共聚焦顯微鏡觀察，采取圖像。
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第3年
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