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原位末端凋亡檢測(cè)（Tunel）
實(shí)驗(yàn)原理： TUNEL技術(shù)可對(duì)組織或細(xì)胞中凋亡小體或單個(gè)凋亡細(xì)胞進(jìn)行染色，能準(zhǔn)確反映細(xì)胞凋亡典型的生物化學(xué)和形態(tài)特征。凋亡細(xì)胞內(nèi)內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶被而將自身染色體DNA切斷成缺口或3-OH末端片段這一特點(diǎn)，利用脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶將標(biāo)有標(biāo)記物(如，生物素或熒光素)的脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移到3-OH末端，再用組化法或熒光檢測(cè)凋亡細(xì)胞。
菌落的裂解及DNA結(jié)合于纖維素濾膜
（1） 在一張保鮮膜上制作一個(gè)裝有0.5mol/L NaOH的小洼（0.75ml），使菌落面朝上，將濾膜放到小洼上，展平保鮮膜，使濾膜均勻濕潤(rùn)，染色體原位雜交經(jīng)驗(yàn)的公司，讓濾膜留于原處2-3分鐘。
（2） 用干紙巾從濾膜的下方吸干濾膜，用一張新的保鮮膜和新配制的0.5mol/L NaOH重復(fù)步驟（1）。
（3） 吸干濾膜，將濾膜轉(zhuǎn)移到新的帶有1mol/L Tris·Cl(pH7.4）的保鮮膜洼上。5分鐘后吸干濾膜，再重復(fù)一次該步驟。
（4） 吸干濾膜，把它轉(zhuǎn)移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4）的保鮮膜小洼上5分鐘后吸干濾膜，轉(zhuǎn)移到一張干的濾紙上，置于室溫20-30分鐘，使濾膜干燥。
（5） 將濾膜夾在兩張干的濾紙之間，在真空烤箱中于80℃干烤2小時(shí)，固定DNA。
（6） 將固定在膜上的DNA與32 P標(biāo)記的RNA進(jìn)行雜交。
原位雜交第三天
1） 用1ml含10%熱滅清的MABT溶液置換溶液，放置搖床上25分鐘，然后用1mlMABT置換，25分鐘，再用1mlMABT溶液置換，一小時(shí)以上，后用1mlMABT溶液置換，25分鐘。
2） 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置五分鐘。
3）將胚胎轉(zhuǎn)入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate（底物，用之前加5mM左旋米唑），十六孔板外面包上錫箔紙以避光，避免搖動(dòng)，室溫下顯色。
4）每隔一小時(shí)觀察胚胎是否開(kāi)始顯色
5）將顯色完全的胚胎中的底物吸出，用PBST洗兩三次后加上4%多聚甲醛固定，拍照。
6）4C冰箱保存。
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第3年
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